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黃曲霉毒素B1 酶免檢測試劑盒

黃曲霉毒素B1 酶免檢測試劑盒

預期用途適用于各類食品、飼料及相關原料中AFB1的檢測。
檢驗原理本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔板上預包被黃曲霉毒素B1抗原。檢測時,包被抗原和樣品溶液中的黃曲霉毒素B1競爭性地與黃曲霉毒素B1抗體反應,加入酶標記物結合抗體,經TMB底物顯色,加入終止液終止反應。樣品中的黃曲霉毒素B1含量與吸光度值成反比,通過標準曲線計算樣品中黃曲霉毒素B1的含量。

試劑盒組成
序號 組分名稱 數量 序號 組分名稱 數量
1 包被反應板 1塊 7 顯色劑B 6 ml×1瓶
2 樣品稀釋液(5×) 25ml×1瓶 8 終止液 6 ml×1瓶
3 標準品工作液 6瓶,1ml/瓶 9 洗液(20×) 25ml×1瓶
4 AFB1抗體 6 ml×1瓶 10 說明書 1份
5 酶標二抗 11 ml×1瓶 11 自封袋 1個
6 顯色劑A 6 ml×1瓶 12 封板膜 3張
 
標準品濃度為0ppb,0.1ppb,0.25 ppb,0.5 ppb,1.0 ppb,2.0 ppb。
溶液的配制
1.洗液:用去離子水將洗液(20×)按1:19體積稀釋,即1份洗液(20×)加入19份去離子水。
2.樣品稀釋液:用去離子水將樣品稀釋液按1:4體積稀釋,即1份樣品稀釋液(5×)加入4份去離子水混勻得D液,棄去1/10 D液,再加入1/10 D液體積的甲醇即為樣品稀釋液。
3.樣品提取液:先配1L 0.02M PBS(配方:NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4·12H2O 3.63g,KH2PO4 0.24g),取0.02M PBS和等體積甲醇混勻即可用于提取樣品中黃曲霉毒素B1。
需要而未提供的設備和材料
酶標儀(配有450nm濾光片)、50-300μl多通道微量移液器及配套槍頭、恒溫培養箱、4-8℃冰箱、小型粉碎機、感量0.01g天平、100ml具塞三角瓶、漏斗、快速定性濾紙、分液漏斗、蒸發皿、量筒、甲醇(分析純)、三氯甲烷、無水Na2SO4等。
樣品前處理
1.脂肪含量低的谷物如大米、小米、玉米等處理方法
稱取5g粉碎后樣品至100ml具塞三角瓶中,加入25ml樣品提取液,振蕩10-15min,用快速定性濾紙過濾或4000rpm離心5min。取濾液或上清液0.2ml,加入0.6ml樣品稀釋液,混勻后待測。                                                  
 稀釋倍數:20
2.食用油處理方法
用燒杯或平皿稱取5g食用油,取20ml正己烷分數次將樣品轉移至150ml分液漏斗中,加入25ml樣品提取液,加塞振搖10-15min,靜置分層,放出下層提取液。取0.2ml提取液加入0.6ml樣品稀釋液,混勻后待測。                             
稀釋倍數:20
3.花生仁
  樣品去皮切成小顆粒,稱5.0g于100ml具塞三角瓶中,同時加入20ml正己烷和25ml樣品提取液,加塞振搖10-15min,過濾于150ml分液漏斗中,靜置分層,放出下層樣品提取液。取0.2ml提取液加入0.6ml樣品稀釋液,混勻后待測。          
稀釋倍數:20
4.醬油
 取5g 醬油至150ml分液漏斗,并加入25ml三氯甲烷,蓋嚴塞,振搖10min,靜置分層,取下層三氯甲烷層,在氮氣下吹干或水浴揮發,加入2ml樣品提取液溶解揮干物。取0.2ml提取液加入0.6ml樣品稀釋液,混勻后待測。                    
稀釋倍數:10
5.醋
取5g 醋于100ml具塞三角瓶中,加入25ml樣品提取液并將PH調至中性。取0.2ml提取液加入0.6ml樣品稀釋液,混勻后待測。                        
稀釋倍數:10
6.面粉
稱5.0g樣品至100ml具塞三角瓶中,加入25ml樣品提取液,振蕩10-15min,用快速定性濾紙過濾或4000rpm離心5min。取濾液或上清液0.2ml加入0.2ml樣品稀釋液,混勻后待測。                                                          
稀釋倍數:10
7.配合飼料及原料(玉米、花生餅、棉籽餅、豆柏等)
樣品粉碎后混勻,稱取5.0g至100ml具塞三角瓶中,加入25ml樣品提取液,振蕩10-15min,用快速定性濾紙過濾或4000rpm離心5min。取濾液或上清液0.2ml加入1.8ml樣品稀釋液,混勻后待測。                                        
稀釋倍數:50
8.濃縮飼料
樣品粉碎后混勻,稱取5.0g至100ml具塞三角瓶中,加入25ml樣品提取液,振蕩10-15min,用快速定性濾紙過濾或4000rpm離心5min。取濾液或上清液5ml于125ml分液漏斗中,加入10ml三氯甲烷,加塞輕輕振搖5min,靜置分層。放出下層三氯甲烷層,用快速定性濾紙過濾于玻璃管中。再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中振搖,收集下層過濾于上述玻璃管中。用氮吹儀吹干。加入5ml樣品稀釋液溶解得樣品提取液。取0.2ml濾液加入1.8ml樣品稀釋液,混勻后待測。                                        
稀釋倍數:50
若樣品中AFB1含量較高,可以適當提高樣品稀釋倍數。
檢驗方法
1.將所需試劑從冷藏環境中取出平衡至室溫。
2.編號:將標準品和樣品對應微孔板按序編號。
3.加樣:加入標準品或樣品50μl到對應微孔中,再加入酶標二抗50μl,最后加入AFB1抗體50μl,輕輕振蕩混勻。
4.溫育(一):貼上封板膜,37℃±2℃溫育30分鐘。
5.洗板(一):洗板機洗或手洗,方法如下:
① 手洗:傾去內容物,用洗液注滿反應孔,靜置5秒至10秒后吸去或棄去,在毛巾或吸水紙上拍干。如此洗板重復5次。
② 洗板機洗:洗板次數為5次,每次洗液在孔中滯留時間為5-10秒,洗液應注滿反應孔,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在毛巾或吸水紙上拍干。
6.加顯色劑:每孔加入顯色劑A 50μl,全部加完后再在每孔中加入顯色劑B 50μl,混勻。
7.溫育(三):37℃±2℃顯色10分鐘。
8.終止:顯色完畢后立即于每孔加50μl終止液,混勻,加終止液的順序同顯色劑A和顯色劑B。
9.測定:終止后應在5分鐘內完成判讀。用酶標儀在450nm波長處測定吸光值?;蚴褂秒p波長測定吸光度A值,測定波長為450nm,參考波長可選630nm。
結果判定
將系列AFB1標準品溶液(0、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0 ppb)測得的吸光度A值繪制成標準曲線。橫坐標為標準品濃度的常用對數(lgC),縱坐標為各濃度標準品吸光度值與0 ppb標準品溶液的吸光度值的比值(A(標準溶液)/A(0ppb)。
計算待測樣品孔A值與A(0ppb的比值,帶入標準曲線得到相應的待測樣液濃度(C)的常用對數值lgC,求反對數即為待測樣液中AFB1的濃度,乘以稀釋倍數即為樣品中AFB1的實際量。
備注:如結果呈陽性反應,應用其他檢驗方法(如色譜/質譜方法等)進行確證。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析,歡迎來電索取。
試劑盒參數
本試劑盒檢測下限為0.1ppb
檢測范圍為0.1 ppb ~2.0 ppb
B0吸光度最佳值應大于1.0
物質交叉反應0—30%
回收率80%-110%
試劑盒吸光度板內誤差小于10%,板間誤差小于15%。
注意事項
1.使用試劑盒前,仔細閱讀說明書。
2.試劑及樣品沒有恢復至室溫會導致所有標準品的OD值偏低。
3.每種試劑使用前均需搖勻,混合時應避免出現氣泡。
4.洗滌時要迅速,洗滌液不可溢出,以防交叉污染。
5.整個加樣過程要快,應控制在3分鐘內,保證前后反應時間一致;加樣時,槍頭不要接觸微孔內表面或孔內溶液。
6.加樣后要輕輕振搖酶標板,使反應液混勻。
7.請使用精確微量移液器。
8.試劑過期不得使用,不同批號的試劑盒中的組份不得混用,封板膜不得重復使用,試劑瓶蓋切勿交叉使用。
9.試劑開封后如未用完,板條應和干燥劑一起放入自封袋內密封2-8℃保存,一周內使用,其它液體組份使用后瓶蓋應擰緊置2-8℃保存,一周內使用。
10.注意控制反應時間,溫育30分鐘應控制在30±2分鐘內,溫育10分鐘應控制在10±1分鐘內,避免因反應時間縮短或延長而造成整體顯色降低或升高。

 


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