犬狂犬病毒抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

【產品名稱】
通用名稱：犬狂犬病毒抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名稱：Diagnostic Kit for the Determination Dog Rabies Virus Antibody (ELISA)
【預期用途】
本品采用酶聯免疫間接法檢測犬血清或血漿中的犬狂犬病毒抗體，適用于免疫接種效果的監控、個體免疫狀態的確定，可用于動物疫病的調查。

【檢驗原理】
微孔板上包被的犬狂犬病毒抗原，可與待測樣品中的特異性抗體（抗-Rv）反應，形成抗原-抗體復合物被吸附到固相上，再加入酶標記的抗犬IgG，則形成“固相犬狂犬病毒抗原-犬狂犬病毒抗體-抗犬抗體-HRP”免疫復合物，洗滌后，如待測樣品中含有犬狂犬病毒抗體，加入顯色劑即顯色，為陽性，反之為陰性。
【試劑盒組成】

序號	組分名稱	數量	序號	組分名稱	數量
1	包被反應板	96T×2包	7	顯色劑B	11ml×1瓶
2	陰性對照	1ml×1瓶	8	終止液	11ml×1瓶
3	陽性對照	1ml×1瓶	9	洗液(20×)	50ml×1瓶
4	樣品稀釋液	21ml×1瓶	10	說明書	1份
5	酶標記結合物	21ml×1瓶	11	自封袋	2個
6	顯色劑A	11ml×1瓶	12	封板膜	6張

【檢驗方法】
1. 配洗液：將50ml洗液（20×）加純化水稀釋至1000ml，充分搖勻后備用。
2. 編號：每次試驗應在包被板上設空白對照孔1孔，陰性對照孔2孔，陽性對照孔2孔，其余為待檢樣品孔。
3. 加樣品稀釋液：用加樣器在包被板的待檢樣品孔中加入樣品稀釋液，每孔100μl；空白對照孔、陰性對照孔及陽性對照孔不加樣品稀釋液。
4. 加樣：分別于各待檢樣品孔加入待檢樣品10μl，陰性對照孔加入陰性對照血清100μl，陽性對照孔加入陽性對照血清100μl；空白對照孔不加樣。
5. 溫育（一）：充分混勻，貼上封板膜，37±2℃溫育30分鐘。
6. 洗板（一）：洗板機洗或手洗，方法如下：
① 手洗：傾去內容物，用洗液注滿反應孔，靜置15秒至30秒后吸去或棄去，在毛巾或吸水紙上拍干。如此洗板重復5次。
② 洗板機洗：洗板次數為5次，每次洗液在孔中滯留時間為15-30秒，洗液應注滿反應孔，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在毛巾或吸水紙上拍干。
7. 加酶標結合物：除空白對照孔以外，各孔中加入酶標結合物100μl。
8. 溫育（二）：貼上封板膜，37±2℃溫育30分鐘。
9. 洗板（二）：方法同洗板（一）。
10. 加顯色劑：每孔加入顯色劑A 50μl，全部加完后再在每孔中加入顯色劑B 50μl，混勻。
11. 溫育（三）：37±2℃顯色10分鐘。
12. 終止：顯色完畢后立即于每孔加50μl終止液，混勻。
13. 測定：終止后應在10分鐘內完成判讀。對空白對照調零，用酶標儀在450nm波長處測定吸光值?；蚴褂秒p波長測定吸光值，測定波長為450nm，參考波長可選630nm或655nm。
【檢驗結果的解釋】
1. 試劑盒Cut Off值=0.1+陰性對照OD平均值（若陰性對照OD平均值≥0.05則按實際值計算；若陰性對照OD平均值＜0.05則按0.05計算）。
2. 若待檢樣品OD值＜Cut Off值，結果判陰性。
3. 若待檢樣品OD值≥Cut Off值，結果判陽性。
【試劑盒性能指標】

指標項目	雙波長測定（測定波長：450nm；參考波長：630nm或655nm）	單波長測定（測定波長：450nm）
空白對照孔OD值	≤0.05	≤0.15
陰性對照孔OD值	≤0.15	≤0.25
陽性對照孔OD值	≥0.6	≥0.7

注：使用單波長測定時，各孔OD值應先減去空白對照孔OD值，再進行結果分析。
如未達到以上指標，試驗無效需重做。
【注意事項】
1. 本試劑盒僅適用于對犬血清或血漿中犬狂犬病毒抗體的檢測，不能用于其他畜類樣品的檢測。所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
2. 試劑盒保存于2-8℃，使用前整套試劑應平衡至室溫。
3. 試劑開封后如未用完，板條應和干燥劑一起放入自封袋內密封2-8℃保存，一周內使用，其它液體組份使用后瓶蓋應擰緊置2-8℃保存，一周內使用。
4. 檢測時必須設置空白對照（只加顯色劑和終止液，不加酶標結合物），并在結果分析時，單波長測定應扣除空白值，雙波長測定不應扣除空白值。
5. 注意控制反應時間，溫育30分鐘應控制在30±2分鐘內，溫育10分鐘應控制在10±1分鐘內，避免因反應時間縮短或延長而造成整體顯色降低或升高。
6. 試劑過期不得使用，不同批號的試劑盒中的組份不得混用，封板膜不得重復使用，試劑瓶蓋切勿交叉使用。