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??谔阋卟《緛喼?I 型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)

??谔阋卟《緛喼?I 型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)
【產品名稱】
     通用名稱:??谔阋卟《緛喼?I 型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)
     英文名稱:Diagnostic Kit for Antibodies to Cattle foot and mouth disease virus (ELISA)
【預期用途】
本品采用酶聯免疫間接法檢測牛血清或血漿中的口蹄疫病毒(亞洲I型)抗體,適用于評估牛場??谔阋咭呙缑庖郀顩r,可用于動物疫病的調查。

 

檢驗原理
微孔板上包被的??谔阋卟《荆▉喼轎型)抗原,可與待測樣品中的特異性抗體(抗-FMDV)反應,形成抗原-抗體復合物被吸附到固相上,再加入酶標記的抗牛IgG,則形成“固相??谔阋卟《荆▉喼轎型)抗原-??谔阋卟《荆▉喼轎型)抗體-抗??贵w-HRP”免疫復合物,洗滌后,如待測樣品中含有??谔阋卟《荆▉喼轎型)抗體,加入顯色劑即顯色,為陽性,反之為陰性。
試劑盒組成
序號 組分名稱 數量 序號 組分名稱 數量
1 包被反應板 96T×2包 7 顯色劑B 11ml×1瓶
2 陰性對照 1ml×1瓶 8 終止液 11ml×1瓶
3 陽性對照 1ml×1瓶 9 洗液(20×) 50ml×1瓶
4 樣品稀釋液 21ml×1瓶 10 說明書 1份
5 酶標結合物 21ml×1瓶 11 自封袋 2個
6 顯色劑A 11ml×1瓶 12 封板膜 6張
 
檢驗方法
1. 配洗液:將50ml洗液(20×)加純化水稀釋至1000ml,充分搖勻后備用。
2. 編號:每次試驗應在包被板上設空白對照孔1孔,陰性對照孔2孔,陽性對照孔2孔,其余為待檢樣品孔。
3. 加樣品稀釋液:用加樣器在包被板的待檢樣品孔中加入樣品稀釋液,每孔100μl;空白對照孔、陰性對照孔及陽性對照孔不加樣品稀釋液。
4. 加樣:分別于各待檢樣品孔加入待檢樣品10μl,陰性對照孔加入陰性對照血清100μl,陽性對照孔加入陽性對照血清100μl;空白對照孔不加樣。
5. 溫育(一):充分混勻,貼上封板膜,37±2℃溫育30分鐘。
6. 洗板(一):洗板機洗或手洗,方法如下:
① 手洗:傾去內容物,用洗液注滿反應孔,靜置15秒至30秒后吸去或棄去,在毛巾或吸水紙上拍干。如此洗板重復5次。
② 洗板機洗:洗板次數為5次,每次洗液在孔中滯留時間為15-30秒,洗液應注滿反應孔,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在毛巾或吸水紙上拍干。
7. 加酶標結合物:除空白對照孔以外,各孔中加入酶標結合物100μl。
8. 溫育(二):貼上封板膜,37±2℃溫育30分鐘。
9. 洗板(二):方法同洗板(一)。
10. 加顯色劑:每孔加入顯色劑A 50μl,全部加完后再在每孔中加入顯色劑B 50μl,混勻。
11. 溫育(三):37±2℃顯色10分鐘。
12. 終止:顯色完畢后立即于每孔加50μl終止液,混勻。
13. 測定:終止后應在10分鐘內完成判讀。對空白對照調零,用酶標儀在450nm波長處測定吸光值?;蚴褂秒p波長測定吸光值,測定波長為450nm,參考波長可選630nm或655nm。
檢驗結果的解釋
1. 試劑盒Cut Off值=0.1+陰性對照OD平均值(若陰性對照OD平均值≥0.05則按實際值計算;若陰性對照OD平均值<0.05則按0.05計算)。
2. 若待檢樣品OD值<Cut Off值,結果判陰性。
3. 若待檢樣品OD值≥Cut Off值,結果判陽性。
試劑盒性能指標
指標項目 雙波長測定(測定波長:450nm;參考波長:630nm或655nm) 單波長測定(測定波長:450nm)
空白對照孔OD值 ≤0.05 ≤0.15
陰性對照孔OD值 ≤0.15 ≤0.25
陽性對照孔OD值 ≥0.6 ≥0.7
注:使用單波長測定時,各孔OD應先減去空白對照孔OD值,再進行結果分析。
如未達到以上指標,試驗無效需重做。
注意事項
1. 本試劑盒僅適用于對牛血清或血漿中口蹄疫亞洲I型病毒抗體IgG的檢測,不能用于其他畜類樣品的檢測。所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
2. 試劑盒保存于2-8℃,使用前整套試劑應平衡至室溫。
3. 試劑開封后如未用完,板條應和干燥劑一起放入自封袋內密封2-8℃保存,其它液體組份使用后瓶蓋應擰緊置2-8℃保存。
4. 檢測時必須設置空白對照(只加顯色劑和終止液,不加酶標結合物),并在結果分析時,單波長測定應扣除空白值,雙波長測定不應扣除空白值。
5. 注意控制反應時間,溫育30分鐘應控制在30±2分鐘內,溫育10分鐘應控制在10±1分鐘內,避免因反應時間縮短或延長而造成整體顯色降低或升高。
6. 試劑過期不得使用,不同批號的試劑盒中的組份不得混用,封板膜不得重復使用,試劑瓶蓋切勿交叉使用。

 


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