雞禽流感病毒抗體（H5亞型）檢測試劑盒 （酶免法）

【檢驗原理】
微孔上包被的禽流感病毒（H5型）HA蛋白抗原，可與待測樣品中特異性抗體(抗-HA，H5型)反應，形成抗原-抗體復合物被吸附到固相上，再加入酶標記的抗雞IgG，則形成“固相禽流感病毒H5抗原-禽流感病毒H5抗體-抗雞抗體-HRP”免疫復合物，洗滌后，如待測樣品中含有H5型抗體，加入顯色劑即顯色，為陽性，反之為陰性。
【主要組成成分】

【檢驗方法】
1. 配洗液：將50ml洗液（20×）加純化水稀釋至1000ml，充分搖勻后備用。
2. 編號：每次試驗應在包被板上設空白對照孔1孔，陰性對照孔2孔，陽性對照孔2孔，其余為待檢樣品孔。
3. 加樣品稀釋液：用加樣器在包被板的待檢樣品孔中加入樣品稀釋液，每孔100μl；空白對照孔、陰性對照孔及陽性對照孔不加樣品稀釋液。
4. 加樣：分別于各待檢樣品孔加入待檢樣品10μl，陰性對照孔加入陰性對照血清100μl，陽性對照孔加入陽性對照血清100μl；空白對照孔不加樣。
5. 溫育（一）：充分混勻，貼上封板膜，37±2℃溫育30分鐘。
6. 洗板（一）：洗板機洗或手洗，方法如下：
① 手洗：傾去內容物，用洗液注滿反應孔，靜置15秒至30秒后吸去或棄去，在毛巾或吸水紙上拍干。如此洗板重復5次。
② 洗板機洗：洗板次數為5次，每次洗液在孔中滯留時間為15-30秒，洗液應注滿反應孔，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在毛巾或吸水紙上拍干。
7. 加酶標結合物：除空白對照孔以外，各孔中加入酶標結合物100μl。
8. 溫育（二）：貼上封板膜，37±2℃溫育30分鐘。
9. 洗板（二）：方法同洗板（一）。
10. 加顯色劑：每孔加入顯色劑A 50μl，全部加完后再在每孔中加入顯色劑B 50μl，混勻。
11. 溫育（三）： 37±2℃顯色10分鐘。
12. 終止： 顯色完畢后立即于每孔加50μl終止液，混勻。
13. 測定： 終止后應在10分鐘內完成判讀。對空白對照調零，用酶標儀在450nm波長處測定吸光值?；蚴褂秒p波長測定吸光值，測定波長為450nm，參考波長可選630nm或655nm。
【檢驗結果的解釋】
1. 試劑盒Cut Off值=0.1+陰性對照OD平均值（若陰性對照OD平均值≥0.05則按實際值計算；若陰性對照OD平均值＜0.05則按0.05計算）。
2. 若待檢樣品OD值＜Cut Off值，結果判陰性。
3. 若待檢樣品OD值≥Cut Off值，結果判陽性。
【試劑盒性能指標】

注：使用單波長測定時，各孔OD值應先減去空白對照孔OD值，再進行結果分析。
如未達到以上指標，試驗無效需重做。
【注意事項】
1. 本試劑盒僅適用于對雞血清或血漿的檢測，不能用于其他禽類樣品的檢測。所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
2. 試劑盒保存于2-8℃，使用前整套試劑應平衡至室溫。
3. 試劑開封后如未用完，板條應和干燥劑一起放入自封袋內密封2-8℃保存，其它液體組份使用后瓶蓋應擰緊置2-8℃保存。
4. 檢測時必須設置空白對照（只加顯色劑和終止液，不加酶標結合物），并在結果分析時，單波長測定應扣除空白值，雙波長測定不應扣除空白值。
5. 注意控制反應時間，溫育30分鐘應控制在30±2分鐘內，溫育10分鐘應控制在10±1分鐘內，避免因反應時間縮短或延長而造成整體顯色降低或升高。
6. 試劑過期不得使用，不同批號的試劑盒中的組份不得混用，封板膜不得重復使用，試劑瓶蓋切勿交叉使用。